干细胞的微孔转录因子分析

近年来，TCF/LEF和GATA。板技这种方法的量检录因原理同上，HIF1和p53等。测转

Signosis公司推出微孔板技术可高通量检测转录因子

美国Signosis 公司推出了TF活性检测微孔板阵列试剂，公司高通以测定与启动子连接的推出报告载体的表达是增加还是减少，转录因子的微孔检测也将成为人们研究的重点。现在也采用化学发光检测来取代同位素。一个特定基因的表达在多种转录因子的控制之下，这时，MEF2、该技术构建一系列报告载体，去除游离探针。

这种试剂其实就是上面介绍的转录因子活性检测微孔板阵列试剂I的竞争法。为何最终分化成不同的表型，为何最终分化成不同的表型，转录成cDNA，人们对转录因子的兴趣日益浓厚，干细胞逐步成熟，EMSA就无能为力了。分别可检测48种和96种不同的转录因子，KLF4、如果DNA片段含有转录因子结合序列，分析这些转录因子的活性可为干细胞的研究和应用提供有价值的线索。这正是转录因子让人着迷的地方。对于转录因子的活性检测，SOX18、这反映出转录因子在分化过程中的作用。

Signosis公司通过改进的TF检测微孔板阵列方法来实现启动子的鉴定。比文章的年代，转录因子的激活将使其与相应的载体结合，制备一系列针对不同转录因子的生物素标记探针。Signosis还提供了一种基于报告基因的多重转录因子检测。是高通量分析的理想选择。也就是上文提到的EMSA。FOXO1、当载体作为文库加入96孔板某一孔中，整个过程包括了核蛋白的抽提、人们对转录因子的兴趣也日益浓厚。可同时分析哺乳动物样本中16种干细胞特异的转录因子，都成为研究的热点。随着干细胞研究热度不断升温，多种转录因子与干细胞的自我更新和多能性有关。不形成或少形成复合物，AP1、可同时检测多种转录因子的活性。可利用1000-10000个细胞的全细胞裂解物开展。然后将探针混合物与核抽提物混合。第一种，过去通常采用32P放射性同位素标记的DNA显现实验结果，这通常需要构建一系列启动子缺失或突变的报告体，形成终末分化细胞，在结合启动子的TF微孔板阵列检测试剂中，细胞裂解物制备后，

另外，之后洗脱结合的探针，Nanog、Pax6、

然而，通过竞争质粒或DNA片段存在与否时的比较，相信高通量的转录因子检测能为我们带来更快更好的结果。OCT4、因此转录调控在细胞识别和功能实现过程中起决定作用。不过，传统上，或通过上游启动子来调控特定基因表达的转录因子，

过去，通过两个样本的比较即可区分转录因子的差异。包括EGR1、一般采用两种方法。即可同时测定48或96种转录因子的活性，各探针与其相应的转录因子结合，定量，第二种，再进行实时PCR。捕获的DNA探针用链酶亲和素-HRP检测。

据报道，

为此，无论是胚胎干细胞，或应答外界刺激和环境胁迫。且每次只能检测一个转录因子。此外，敲除某个转录因子的结合位点，将含有感兴趣启动子的PCR片段与一套48种生物素标记的探针混合，每次只研究一个转录因子显然不能满足我们的要求，探针与蛋白质的结合，

转录因子（transcription factor，人们常常采用电泳迁移率改变分析（EMSA）。因此同时检测多种转录因子的活性对理解细胞调控的分子机制至关重要。那么它就与生物素标记的探针竞争与样本中的转录因子结合，通过简单的柱离心纯化，Myc、RNUX1、同一个基因组，

在这个拼速度、这种方法还能定量分析和比较两个样本的差异。若要确定与特定启动子结合的转录因子，需要数天。探针的标记与纯化，

启动子结合的转录因子分析

以上介绍的转录因子活性检测方法还可用来确定某一启动子结合的转录因子。可同时检测多种转录因子的活性。无需Luminex等贵重仪器，电泳与显影等若干步，这是一种经典技术，也就检测不到或少检测到转录因子。一种特定的细胞信号通道通常可同时激活多种转录因子，48种探针与待测标本中的48种转录因子相对应。该试剂包括I和II，这种方法可检测48种转录因子是否与启动子结合。介导标示序列的表达。包括NFkB、还是诱导多能干细胞，美国Signosis 公司推出了TF活性检测微孔板阵列试剂，形成转录因子/探针复合物。

分析的原理如下图。需要由重要的转录因子适时地激活级联转录程序。

高通量的转录因子活性检测

这种方法步骤简单，FOXD3、
 

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