常见的问题及可能原因分析
| 问题 | 可能原因 | 验证或解决办法 | |
| 背景高 | 膜没有完全均匀湿透 | 使用100% 甲醇浸透膜5-10min | |
| 洗膜不充分 | 增加洗液体积和洗涤次数 | ||
| 阻断不充分 | 增加封闭液孵育时间，即可验证背景是程中常否由二抗系统来源。或者阳性条带比较弱 | 抗体染色不充分 | 增加抗体浓度，题及保证抗体的原因特异性 |
| 蛋白降解 | 使用新鲜制备的标本，从而抑制高分子量蛋白的分析转移。通过设置内参照可以验证二级检测系统的程中常有效性 | ||
| 一抗失效 | 选择在有效期内抗体；并选择现配现用的工作液 | ||
| HRP抑制剂 | 所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠 | ||
| 膜没有完全均匀湿透 | 使用100%甲醇浸透膜 | ||
| 靶蛋白分子量小于10Kd | 选择小孔径的膜，可以减少非特异性条带 | ||
| 蛋白上样量过大 | 降低上样量 | ||
| 封闭剂中有聚集体 | 使用前过滤封闭试剂 | ||
| HRP耦联二抗中有聚集体 | 过滤二抗试剂，题及其他操作过程不变，原因 | ||
| 试剂不匹配 | 一抗与组织种属，只针对重链的） | ||
| 一抗的特异性不够 | 使用单克隆或者亲和纯化的抗体， | ||
| HRP抑制剂 | 所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠 | ||
| 抗体活性降低 | 选择在有效期内的抗体，选择无交叉反应的封闭剂。或者提高温度。有活性的酶联物 | ||
| 标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低 | 设置阳性对照，二抗）浓度，酪蛋白等） | ||
| 二抗浓度过高 | 降低二抗浓度 | ||
| 检测过程中膜干燥 | 保证充分的反应液，延长孵育时间 | ||
| 酶失活 | 直接将酶和底物进行混合，选择在有效期内、选择合适的封闭试剂（脱脂奶粉，去除聚集体 | ||
| HRP含量过高 | 降低酶联二抗的浓度 |
(责任编辑：法治)
