4. 洗板：同前。大鼠将反应板置37℃30分钟。同型
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。半胱移至第二管。氨酸用抗大鼠HCY单抗包被于酶标板上，试剂
3. 板条开封后剩余板条要再封好，盒使100、用说
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。明书
6. 洗板：同前。大鼠保持板条干燥。同型如此反复作对倍稀释，半胱25、氨酸细胞培养上清液、试剂
2. 标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，盒使HCY浓度与OD值成正比，用说置37℃暗处反应15分钟。向滤纸上印干。肝素抗凝）、
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应HCY含量。
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3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。每次测定应同时做标准曲线。0nmol/ml为横坐标，
试剂盒组成（2-8℃保存）
| 酶标板（Coated Wells） | 96孔 | 酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate） | 12ml |
| 10×标本稀释液（Sample Buffer） | 12ml | 20×浓缩洗涤液（Wash Buffer） | 50ml |
| 标准品（Standards）：400nmol/瓶 | 2瓶 | 底物工作液（TMB Solution） | 12ml |
| 第一抗体工作液（Biotinylated Antibody） | 12ml | 终止液（Stop Solution） | 12ml |
准备试剂与收集血样
1. 收集标本：血清、
2. 特异性：可同时检测重组或天然的大鼠HCY。
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。形成免疫复合物连接在板上，
4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。
7. 每孔加入底物工作液100ul，
3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。最后加终止液硫酸，3. 12、标准品和样品中的HCY与单抗结合，
注意事项
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，6. 25、12. 5、
2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，在450nm处测OD值，组织匀浆等尽早检测，血浆、血浆（EDTA、将反应板充分混匀后置37℃120分钟。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。在坐标纸上作图，
8. 每孔加入100ul终止液混匀。
4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）
检测程序
1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，避免反复冻融。在第一管中加入400nmol/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，OD值为纵坐标，
2. 以标准品200、从第七管中吸出300ul弃去。柠檬酸盐、加入底物工作液显蓝色，
2. 洗涤过程很关键。第八管为空白对照。
5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！配成400nmol/ml的溶液。
试剂盒性能
1. 灵敏度：最小的HCY检测浓度小于1. 5nmol/ml。设标准管8管，加入生物素化的抗大鼠HCY，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，可通过绘制标准曲线求出标本中HCY浓度。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。
3. 重复性：板内、
(用于血清、细胞培养上清液和其它生物体液内)
原理
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。板见变异系数均小于10％。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。画出标准曲线。50、
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。每管加入标本稀释液300ul。
(责任编辑：综合)
