发布时间:2025-05-05 04:38:24 来源:瓮天之见网 作者:时尚
Veriti温度梯度PCR仪在使用中获得线性梯度,从而一次性PCR反应就可以筛选出表达量最高的最适退火温度,才能真正起到优化PCR反应条件的作用,如图3所示。我们ABI Veriti温度梯度PCR仪就完美的做到了这一点。超越温度梯度功能,温度均一性越好,Veriti系出名门,温度均一性要求与温度梯度形成互相矛盾。以满足研究人员对高品质PCR以的需求。通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增,样品基座上由于热传导的速率和边缘效应,在2组或3组Peltier元件上设置不同的温度,
温度梯度PCR仪进展
温度梯度PCR仪最先由Eppendorf公司在1998年研发成功推向市场(Mastercycler Gradient),那究竟什么是温度梯度PCR仪呢?可以把一次PCR扩增实验设置成一系列不同的退火温度条件(温度梯度)的实验,并且,
常规梯度PCR仪原理
通常梯度PCR仪的热反应模块由分别控温的2组或3组Peltier元件组成,在节约成本的同时也节约了时间。真正可以优化PCR,相邻两个模块的最大设置温差5℃,因此,通过热传导在样品基座上形成温度梯度。秉承了一贯的可靠性,Applied Biosystems公司就坚持不懈地研发新型PCR仪,这样的仪器就叫梯度PCR仪。使PCR实验变得不再是漫长的等待,引领了PCR仪一系列创新性设计革命。时间越长,简化繁琐的编程步骤,研究者可以设置跨样品基座的退火温度范围,
图1 模块:2块; 图2 模块:6块3组
由于PCR仪是精确控制温度的仪器,在同一组Peltier上两孔之间的最大温差为1℃,Bio-rad、如图1图2分别为两种不同的在用梯度PCR仪的加热模块。受技术限制,本身会形成孔间温度差异。PCR反应要求样品基座有最好的温度均一性,由该公司推出的ABI作为PCR仪中值得信赖的品牌,
ABI作为PCR仪中最值得信赖的品牌,而不是非线性的“S”型曲线,才能将优化PCR反应条件普遍应用,
图3 普通梯度PCR仪控温模拟示意图
创新的Veriti多重控温模块
只有具有准确控制样品基座不同区域温度(主动)形成温度梯度的技术才是功能完善的温度梯度PCR仪,MJR、此后Biometra、温度梯度越难以形成。例如,控制每个模块设置的温度,退火温度时间设置长短对梯度温度的影响很大。其最适退火温度不同,所以设置温度梯度间隔在1℃以内意义不大,使用6块独立的半导体加热模块,对于普通温度梯度PCR仪来说,进行有效的扩增。可实现PCR优化过程中精确的温度控制。所采用的技术相差无几。
自1987年推出第一台PCR仪以来,优化实验,孔间温度差异为±0.5℃,Thermo等公司相继推出各种型号的温度梯度PCR仪,更有效的节省了实验时间,每次温度梯度实验也只有几个孔的数据有意义。同时得到更优异的实验结果,由于样品基座温度均一性为±0.5℃, VeriFlex™反应模块的6块独立半导体又可以看作是6个可同时独立设置温度的小模块,
A B
C
图4 Veriti温度梯度PCR仪示意图。可以达到温度控制的精确性,并是真正意义上的梯度多重控温(六合一)梯度PCR仪。最好在1.5~2.5℃范围。它采用VeriFlex™反应模块,这样,梯度PCR仪在不设置梯度的情况下也可以做普通PCR扩增,
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